哈啰大家好！~凭爱豆表情包认人！是我是我就是我！

本碎嘴子小编好久没和大家见面了，真的是非常想念大家！~

疫情平稳之后，全面复工的小编临危受命，接下了和新冠有关的一个分析工作。所以，苦命的我再一次，又一次，一次又一次，要在完全没有经验的领域里从零起步学。此前小编从来没有接触过免疫学相关分析，这次把最近一个月恶补的知识和技术跟大家做个分享。这次的分享不走段子手风格了，本期的我只是一个莫得感情的科普机器。

今天的分享先讲10X Genomics V(D)J 测序的原理和流程，数据和结果分析我们下一次再讲。

准备好了那咱就开始吧！~

首先，V(D)J测序测得是什么呢？顾名思义，测得是V，D和J基因。VDJ基因是编码生成BCR和TCR的基因。BCR和TCR，是B(T) Cell Receptor的缩写，是一种长在B或T细胞表面的免疫球蛋白，其作用是识别抗原，接收抗原刺激。其中，BCR由重链和轻链组成，TCR由α和β链组成。这里我讲的时候，以BCR为例。TCR类似。

每一个BCR，包含两条重链和两条轻链。其中重链由一个可变区（V区）和三个恒定区（C区）组成，轻链则包含一个可变区与一个恒定区。重链的恒定区，决定了BCR的免疫原性，即决定了它属于5类免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM、IgD、IgE）中的哪一种。而轻链的恒定区，则决定了搭配的轻链种类（k或入型）。而可变区（V区）则决定了它的特异性，即决定了它能和什么样的抗原结合。

轻重链的每种基因片段以多拷贝形式存在，这些基因片段之间被大小不同的基因隔开，每个基因片段都能编码一段蛋白，只有通过基因重组使这些基因片段发生重排和组合，才能形成有功能的BCR。如果把VDJ基因理解成麻将里的万字、筒和条子，就好理解多了。重组酶的作用，就是每次从每一类的所有牌中抽出来几张，最后拼在一起。使得最后成熟的每个B细胞克隆都只含有一个V片段，一个D片段（轻链没有），和一个J片段，且只有一种L-VJC/H-VDJC组合，编码一种BCR。

这种重排机制，对于免疫系统有着重要的意义。通过基因片段的随机重排，才能够生成数量非常庞大的各不相同的BCR或TCR，来应对不同的抗原。BCR在后期还有体细胞高频突变机制，能进一步扩充BCR库的数量，这个我们下一次再细讲。

好的，现在大家明白了VDJ基因是什么。那么接下来开始说10X Genomics如何对VDJ基因进行测序，来完成对样本的免疫学层面的分析。

所以，依据这样的原理，根据VDJ基因旁边编码恒定C区的基因非常保守的原则，将C区的序列设计为引物，每一轮的引物依次向两边来回变换，这样就能保证正确富集含有VDJ区域的基因了。